摘要 目的：建立薄層掃描法分離測(cè)定荷葉中荷葉堿的含量。方法：采用0.5％氫氧化鈉溶液制備的硅膠GF254薄層板，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（30：40：20：10）為展開(kāi)劑，檢測(cè)波長(zhǎng)272 nm。結(jié)果：荷葉堿在0.5～5μg 范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系，平均回收率為97.4％，RSD=3.83％（n=5）。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，穩(wěn)定性高，可作為其質(zhì)量控制依據(jù)。
關(guān)鍵詞:薄層掃描法;荷葉堿;荷葉
荷葉為睡蓮科植物蓮Lelumbo nucifera Gaertn的干燥葉，具有清熱解暑、升發(fā)清陽(yáng)、涼血止血之功效，現(xiàn)代藥理研究證明其具有調(diào)節(jié)血脂、鎮(zhèn)咳祛痰、降低血壓、平滑肌解痙等作用，臨床用于治療高脂血癥、肥胖、肺炎、夏季熱等癥。荷葉中的生物、堿成分具有明顯的降脂生理活性，但其含量測(cè)定方法尚未見(jiàn)報(bào)道，本文采用薄層掃描法，對(duì)其中的荷葉堿進(jìn)行了定量分析，為更好地開(kāi)發(fā)利用荷葉資源和完善提高荷葉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。
1 儀器與試藥
CAMAG TLC SCANNER 3薄層掃描儀（瑞士CAMAG公司）；定量點(diǎn)樣毛細(xì)管（美國(guó)DrummondScientific Co．）；荷葉堿（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；荷葉（市購(gòu)三批，經(jīng)本所鑒定）；硅膠GF254（青島海洋化工有限公司）；試劑均為分析純。
2 薄層色譜及掃描條件
薄層板：0.5％氫氧化鈉溶液制備的硅膠GF254薄層板。展開(kāi)劑：氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（30：40：20：10）10℃以下放置12 h的下層溶液。紫外光254nm下定位，經(jīng)光譜測(cè)定，確定λs=272nm。單波長(zhǎng)線性掃描。此色譜條件下，荷葉堿與其他成分分離良好，色譜掃描圖見(jiàn)圖。
3 方法與結(jié)果
3．1 對(duì)照品溶液的制備
精密稱取荷葉堿對(duì)照品10mg，置10ml棕色量瓶中，加氯仿溶解并稀釋至刻度，搖勻。
3．2 供試品溶液的制備
精密稱取荷葉藥材粉末約1g，置索氏提取器中，加入濃氨水約1ml使?jié)櫇?，再加氯仿適量，回流提取至提取液無(wú)色，取氯仿液蒸干，殘?jiān)勇确氯芙舛哭D(zhuǎn)移并至10ml量瓶中定容至10ml。
3．3 線形關(guān)系考察
用定量毛細(xì)管精密吸取對(duì)照品溶液0.5，1，2，3，4，5μl，分別點(diǎn)于同一用0.5％氫氧化鈉溶液制備的硅膠GF254薄層板上，按上述層析及掃描條件測(cè)定，以斑點(diǎn)峰面積值為縱坐標(biāo)，點(diǎn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=2.37×1000X+5.90×1000，r=0.9991，表明荷葉堿在0.5～5μg間線形關(guān)系良好。
3．4 穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密吸取荷葉堿對(duì)照品溶液2μl，按上述條件點(diǎn)樣，展開(kāi)，掃描，每隔30min測(cè)定1次，結(jié)果表明，斑點(diǎn)在5h內(nèi)穩(wěn)定（RSD=1.1％）。
3．5 精密度試驗(yàn)
分別精密吸取荷葉堿對(duì)照品溶液2μl，在同一薄層板上點(diǎn)l0個(gè)點(diǎn)，展開(kāi)，掃描，結(jié)果峰面積RSD=0.9％。
3．6 重復(fù)性試驗(yàn)
取粉碎后混合均勻的荷葉樣品6份，按供試品溶液的制備方法制備供試液，依法測(cè)定，結(jié)果RSD=1.2％。
3．7 回收率試驗(yàn)
精密稱取已知含量荷葉樣品約0.5g，分別加入一定量的荷葉堿對(duì)照品，按上述方法提取并測(cè)定，計(jì)算回收率。
3．8 樣品測(cè)定
精密稱取荷葉樣品約1g，按供試液制備方法制備，分別精密吸取供試液5 l，對(duì)照品溶液2μl，4μl，點(diǎn)于同一薄層板上，按上述條件測(cè)定，外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量。
4 討論
4．1 薄層掃描法測(cè)定生物堿含量，通常采用生物堿專屬顯色劑稀碘化鉍鉀試液顯色，但顯色后斑點(diǎn)的穩(wěn)定性稍差，本文以熒光板（硅膠GF254）替代硅膠G板，在保證分離效果的同時(shí)，也解決了顯色穩(wěn)定性的問(wèn)題，可供其它生物堿檢測(cè)借鑒。
4．2 提取方法的選擇：曾試用甲醇或乙醇超聲處理法，同樣可得到較好的提取效果，考慮到堿性氯仿回流法為生物堿的一般提取方法，且索氏提取器具有良好的提取效率，故本文采用此方法。
4．3 薄層色譜系統(tǒng)的選擇：經(jīng)篩選優(yōu)化，結(jié)果以本文展開(kāi)系統(tǒng)對(duì)荷葉中生物堿分離。展開(kāi)后的薄層板噴以稀碘化鉍鉀試液驗(yàn)證分離效果，得到的色譜軌跡與254nm紫外光下檢測(cè)到的相同。
4．4 由表看出，不同批次荷葉中荷葉堿的含量相差較大，其與產(chǎn)地栽培、采收加工、貯藏時(shí)間等因素間的關(guān)系，尚有待進(jìn)一步考察。
參考文獻(xiàn)
1 肖培根主編，新編中藥志[M]．北京：化學(xué)工業(yè)出版社．2002.480-482