摘要：目的：測定保肝顆粒中大黃素的含量，制訂該制劑的質量標準。方法：樣品水解后，提取大黃素，制備供試品溶液，用TLCS法定樣品中大黃素的含量。結果：測得三批樣品中大黃素的含量范圍為43.40～45.04mg／袋，加樣回收率為98.72%，變異系數(shù)為1.15%。結論：方法準確、靈敏、重現(xiàn)性好，專屬性強?？勺鳛樵撝苿┑馁|控標準。
    關鍵詞：保肝顆粒； 虎杖； 大黃素； 含量測定； 薄層掃描法
    保肝顆粒是正在研制的中藥6類新藥，具有清熱保肝之功效．本品由虎杖，柴胡等ll味中藥組成．虎杖是本方劑的君藥，其所含大黃素及其苷類又是清熱保肝的主要有效成分。為探討本制劑的內在質量，制定質控標準，參照大黃素含量測定的有關文獻，本文對保肝顆粒中的大黃素進行了含量測定方法的研究。通過方法學的系統(tǒng)考察和三批樣品的含量測定，建立了本制劑中大黃素的含量測定方法，現(xiàn)報告如下。
    1 實驗材料
    1．1 儀器與試劑CS-9301型薄層掃描儀（日本島津公司）。定量毛細管（美國Drummond公司），薄層鋪板儀（重慶新力試驗電器廠），硅膠G（青島海洋化工廠），石油醚（3O一6O℃）、鹽酸、冰醋酸、氯仿等所用試劑均為分析純；大黃素對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，供含量測定用，批號為756—9204。
    1．2 樣品來源及處理 三批保肝顆粒樣品均由本課題組研制，其批號分別為20010305，20010317，20010326；虎杖及制劑所用藥材均購于濟南市建聯(lián)藥材供應站，經(jīng)鑒定虎杖為蓼科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb．et Zucc．的干燥根莖和根，適當粉碎后備用。
    2 實驗方法
    2．1 樣品溶液的制備
    2．1．1 水解時聞的確定 稱取本品粉末約lg，精密稱定，共稱取3份。加蒸餾水5Oml，滴加鹽酸5ml，混勻，加入氯仿5Oml，分別水浴水解1，2，3 h，按以下供試品溶液的試驗方法操作。制備各不同水解時間的樣品液，并均定容至1Oml容量瓶中，吸取相同體積的各樣品液點樣測定，發(fā)現(xiàn)水解1h的樣品中大黃素的測定值偏低，而水解2h和3h樣品的測定值基本相同，表明樣品水解2h即可水解*，故水解時間確定為2h。
    2．1．2 供試品溶液的制備 稱取本品粉末約1g，精密稱定，共稱取3份。加蒸餾水5O ml，滴加鹽酸5 ml，再加入氯仿5Oml，水浴回流水解2h，吸出氯仿液，再加入氯仿（50，30ml）同上回流兩次，0.5h／次，吸出氯仿液，合并3次氯仿液，以5Oml水洗滌1次，棄去水液，回收氯仿至盡，殘渣以無水乙醇定容至1Oml備用。
    2．1. 3 虎杖藥材液的制備 稱取虎杖藥材粉末約0.5 g，精密稱定，按樣品的制備工藝及供試品液的制備方法操作，制成1Oml虎杖藥材溶液，備用。
    2．1．4 大黃素對照液的制備 稱取大黃素對照品適量，以甲醇制成每1ml含大黃素0.2mg的溶液。
    2．1．5 缺虎杖空白液的制備 按處方比例，準確稱取除虎杖外的其它各藥材，模擬本品的制備工藝和供試品液的制備方法制成缺虎杖空白液。
    2．2 薄層色譜條件的選擇
層析板：0.3%CMC 硅膠G板20cm×20cm×0.4mm。105℃活化30min，置干燥器內備用。
展開劑：石油醚（3O～60℃）-醋酸乙酯-冰醋酸（15：1.5；1，V／V ）。
斑點觀察：自然光下檢視為黃色斑點。
    經(jīng)多種色譜條件的篩選發(fā)現(xiàn)，樣品在上述薄層條件下能得到很好的分離，大黃素斑點前后分離*，無明顯干擾。大黃素Rf值較適中（Rf=0.50），而缺虎杖空白液在與大黃素對應的位置上則無對應的斑點。
    2．3 樣品的含量測定
    2．3．1 測定條件采用雙波長鋸齒掃描，測定波長λs=455nm參比波長λR=600nm，狹縫0.4 mm×0.4 mm，線性化參數(shù)Sx=3，外標兩點法測定。
    2．3．2 測定波長的選擇對供試品及大黃素經(jīng)層析后于37O～600nm下進行掃描測定，畫出zui大吸收曲線圖，測得zui大吸收波長為455nm。
    2．3．3 空白干擾試驗分別取供試液2μl，大黃素對照品溶液3μl，缺虎杖空白溶液2μl，點于同一薄層板上．依法展開，取出，在455nm下檢測，結果缺虎杖空白溶液在與對照品相應的位置上沒有吸收峰出現(xiàn)，這表明本測定元明顯干擾。
    2．3．4 線性關系考察準確吸取大黃素對照液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0μl點于同一薄層板上，按選定的色譜條件展開后進行掃描測定，以點樣量（μg）為橫坐標，峰面積積分值（A）為縱坐標，繪制標準曲線。對所得數(shù)據(jù)進行回歸分析得回歸方程；y=2938.9x+563.84，相關系數(shù)r=0.999。
    2．3．5 精密度試驗
    2．3．5．1 同板精密度試驗
    準確吸取同一批供試品液2μl，對照品溶液3μl。于同一薄層板上點5個相同量的點，依法測定峰面積積分值。
    2．3．5．2 異板精密度試驗準確吸取同一批供試品液2μl，對照品溶液3μl，分別點于5塊薄層板上，每板點5個相同量的點，依法測定各板大黃素的含量并計算精密度。
    2．3．6 斑點穗定性試驗將層析后的供試品及對照品分別測定峰面積積分值，每隔20min測定1次，連續(xù)測定7次。結果表明，大黃素在測定時間2 h內斑點顏色比較穩(wěn)定，峰面積積分值基本不變。
    2．3．7 重現(xiàn)性實驗取同一批樣品約1.0 g，精密稱定，共稱取6份，依法制備各供試品溶液，并按以上方法點樣測定，計算各樣品中大黃素的含量。
    2．3．8 回收率實驗稱取保肝顆粒粉末約0.5g，精密稱定，共取5份，各加人大黃素對照品2.26mg，按供試品液的制備項下制備各回收率試驗液，依法測定各試驗液中的大黃素。
    2．3，9 樣品的測定分別準確吸取三批供試品液各2μl和虎杖藥材液1μl，各點于一塊薄層板上，依法測定各批保肝顆粒和虎杖樣品中大黃素的含量。
    3 小結
    3．1 測得三批保肝顆粒中大黃素的含量分別為45.04mg／袋，43.40 mg／袋，44.48 mg／袋，加樣回收率為98.7l％ ，變異系數(shù)RSD為1.15%。
    3．2 試驗中發(fā)現(xiàn)點樣量，薄層板厚度，層析溫度對樣品中大黃素的分離都有較大影響。通過對上述三種條件的篩選發(fā)現(xiàn)，點樣量大于1.6μg，層析板厚度小于0.4mm，溫度高于3O℃時，都易產(chǎn)生不同程度的拖尾。
    3．3 本實驗中供試品采用的水解條件（酸的種類及濃度）是參照《中國藥典）2000年版一部虎杖項下的水解條件確定的。
    3．4 本實驗采用CHCl3提取液回收后直接點樣測定，方法簡便，靈敏度高，重現(xiàn)性好，是控制本品內在質量的較理想方法。
參考文獻：
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