摘要：目的探討人參中人參皂苷Rg1、Re和Rb1的HPLC定量分析方法的測量不確定度的評定方法。方法：通過分析測量過程，確定并簡化不確定度來源；利用HPLC法測定人參中人參皂苷Rg1、Re和Rb1的方法驗證數(shù)據(jù)及經(jīng)驗數(shù)據(jù)，通過統(tǒng)計學(xué)方法，量化不確定度分量；計算合成不確定度和擴(kuò)展不確定度。結(jié)果用HPLC法測定人參中人參皂苷Rg1、Re和Rb1的擴(kuò)展不確定度分別為0.12e，0.14e和0.13e。結(jié)論測量不確定度可用于人參中人參皂苷的標(biāo)準(zhǔn)*的制定；測量不確定度的評定方法的確立對于中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究具有重要意義。
    關(guān)鍵詞：測量不確定度；人參皂苷；液相色譜法；人參
    測量不確定度（measurement uncertainty）是“與測量結(jié)果相關(guān)聯(lián)的參數(shù)，表征合理地賦予被測量量值的分散性”，它是被測量客觀值在某一量值范圍內(nèi)的一個評定，其大小決定了測量結(jié)果的實用價值。不確定度越小，測量結(jié)果的質(zhì)量越高，使用價值越大。測量不確定度與誤差是兩個不同的概念，誤差在實際應(yīng)用中難以確切求得，因此測量不確定度的提出引發(fā)了經(jīng)典誤差理論及測量結(jié)果評定與表示的重大變革，是現(xiàn)代誤差理論形成的基礎(chǔ)。1993年出版的《測量不確定度表示指南》（GUM）中明確規(guī)定了測量不確定度的定義、評定方法及表達(dá)方式，從而使不同學(xué)科、不同地域在表示測量結(jié)果及不確定度時具有一致的含義。
    《測量不確定度表示指南》頒布以來，已被許多性、區(qū)域性組織和國家采用。在分析化學(xué)領(lǐng)域，1995年由歐洲化學(xué)委員會（EURACHEM）起草了《分析測量中不確定度的評定》 ，指引如何將《測量不確定度表示指南》中的定義應(yīng)用于分析測定。目前，測量不確定度的概念在國家計量基準(zhǔn)、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研究和對比中應(yīng)用廣泛，同時逐漸向其他領(lǐng)域滲透。因此，正確表達(dá)和評定測量方法的測量不確定度將逐步成為通行的要求。
    本文將測量不確定度的概念引入中藥質(zhì)量評價及標(biāo)準(zhǔn)制定中，以人參藥材中人參皂苷Rg1，Re和Rb1的HPLC定量方法的測量不確定度的評定為例，探討以方法學(xué)驗證數(shù)據(jù)評定測量不確定度的過程，評定結(jié)果可用于人參的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定。
    材料與方法
    儀器與試劑 美國Agilent HP1100型液相色譜儀，二極管陣列檢測器。人參皂苷Rg1，Re和Rb1均購自中國藥品與生物制品檢定所，含量不低于98％。HPLC級乙腈為美國Merck公司產(chǎn)品，甲醇為分析純（LAB SCAN，愛爾蘭），水為Milli Q超純水。人參藥材由香港政府衛(wèi)生署提供。
    分析條件Beckman Ultrasphere ODS柱（250mm×4.6 mm ID，5μm）；流速1.6mL/min；柱溫25℃；檢測波長203 nm。流動相由乙腈和水組成，梯度洗脫程序為：0—20 min，乙腈的體積百分比為20％；20—60 min，乙腈的體積百分比由20％增至42％
    結(jié)果與討論
    1 精密度研究
    分析10批人參藥材，每批藥材測定兩次，人參皂苷Rg1，Re和Rb1的測量結(jié)果及相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度。
    2 誤差研究
    在用HPLC法測定人參中人參皂苷Rg1，Re和Rb1的方法學(xué)驗證中測定了5次加樣回收率，測量結(jié)果及不確定度分析。
    3 對照品純度
    對照品人參皂苷Rg1，Re和Rb1的標(biāo)示含量不低于98％
    4 樣品均勻性
    人參皂苷在人參藥材的各部位均有分布，不揮發(fā)，且化學(xué)性質(zhì)較穩(wěn)定，根據(jù)文獻(xiàn)，樣品均勻性引起的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度取估計值0.05。
    5 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度和擴(kuò)展標(biāo)準(zhǔn)不確定度
    6 影響人參中人參皂苷Rgl，Re和Rbl的含量測量方法的測量不確定度的因素分析
    各不確定度分量對合成相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度的貢獻(xiàn)。可見，樣品的不均勻性對人參藥材中人參皂苷Rgl，Re和Rbl的HPLC定量方法的測量不確定度影響zui大，而對照品純度的影響zui小。因此樣品不均勻性這一參數(shù)在分析測定時應(yīng)加以嚴(yán)格控制，例如采用合理的取樣方式、增加取樣量、控制粉碎粒度等。
    7 測量不確定度的應(yīng)用
    目前測量不確定度的重要性已經(jīng)得到廣泛的認(rèn)識，一個完整的定量分析結(jié)果應(yīng)該包含不確定度信息，它是定量分析結(jié)果的重要組成部分，可用于評估定量方法的可靠性和測量結(jié)果的可信程度。此外，測量方法的不確定度在方法學(xué)研究等方面也能提供有益的指導(dǎo)，如提供分析過程的主要誤差來源信息以及解決方案等。
    測量不確定度的另一個用途是用于標(biāo)準(zhǔn)的制定。HPLC法測定人參中人參皂苷Rgl，Re和Rbl的含量是香港中藥標(biāo)準(zhǔn)中人參藥材下的檢測項，該標(biāo)準(zhǔn)的檢測*是根據(jù)l0批代表性藥材中人參皂苷的測量平均值及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，以及測量方法的不確定度計算得到。標(biāo)準(zhǔn)制定時考慮測量結(jié)果的不確定度，制定的標(biāo)準(zhǔn)*將更加合理。因此，進(jìn)行測量不確定度的評定方法研究對于中藥標(biāo)準(zhǔn)的制定具有重要意義。
References：
l 1 f International Bureau of Weights and Measures．IS0． Guide to the Expression of Uncertainty in Measurement，International Organization for the Standardization[Z]．Geneve：ISO，1995．2—3．