摘要 目的：建立以薄層掃描法測(cè)定黃皮酰胺含量的方法。方法：固定相系以硅膠G過(guò)240目篩）加0.5％CMC-Na（1：2.5）所制備的薄層板，展開(kāi)劑為氯仿-甲醇（85：15），檢測(cè)波長(zhǎng)為λ=259 nm；掃描方式為單波長(zhǎng)反射法鋸齒掃描，光源氘燈，線性參數(shù)Sx=3，振幅為l0，背景校正：結(jié)果：此法測(cè)得黃皮酰胺含量的平均回收率為97.78％ ，RSD為0.36％ ；其在5.3～53μg／mL范圍內(nèi)濃度與峰面積線性關(guān)系良好（r=0.99l9）。結(jié)論：用薄層掃描法測(cè)定黃皮酰胺的含量，準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好，適合于快速檢驗(yàn)。
    關(guān)鍵詞：黃皮酰胺；薄層掃描法；含量測(cè)定
    黃皮酰胺（elausenamide，clau）是蕓香科黃皮屬植物黃皮Clausena Lamium（Lour．）Skeels葉水浸膏分離得到的有效成分，經(jīng)不對(duì)稱合成和拆合得到左旋和右旋黃皮酰胺。其中左旋黃皮酰胺為活性成分，具有多方面的藥理作用。早期藥理實(shí)驗(yàn)表明其對(duì)四氯化碳引起的小鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶的升高有明顯的降低作用。藥效學(xué)研究提示，左旋黃皮酰胺可促進(jìn)突觸體谷氨酸釋放，增加大鼠皮層厚度和海馬CA1區(qū)數(shù)及NMDA受體密度，提高小鼠腦皮層和海馬的膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶活性 并對(duì)抗樟柳堿引起的乙酰膽堿含量的降低；細(xì)胞外生理研究證明，左旋黃皮酰胺可增強(qiáng)大鼠海馬齒狀回顆粒細(xì)胞層有低頻刺激所誘發(fā)的群峰電位和由強(qiáng)刺激誘發(fā)的。這些結(jié)果表明，左旋黃皮酰胺有促智作用，有望開(kāi)發(fā)成為抗老年癡呆病的新藥。筆者通過(guò)文獻(xiàn)報(bào)道的方法及黃皮酰胺的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，確定了實(shí)驗(yàn)條件，建立了薄層掃描法（TLCS法）測(cè)定黃皮酰胺的含量，為控制黃皮酰胺的質(zhì)量提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
    1 儀器和材料
    儀器：CS-9000型雙波長(zhǎng)薄層掃描儀（日本島津）；939薄層鋪板器（重慶南岸貝爾德儀器技術(shù)廠）；定量毛細(xì)管（美國(guó)Drummonp公司）。
    材料：黃皮酰胺粗品、黃皮酰胺一次甲醇提取物、黃皮酰胺二次甲醇提取物及對(duì)照品均由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥理研究所提供。硅膠G（青島海洋化工廠），所用試劑均為分析純。
    2 方法與結(jié)果
    2．1 對(duì)照品溶液及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
    精密稱取黃皮酰胺對(duì)照品0.53mg，置5mLmL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得濃度為1.06mg／mL的對(duì)照品溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液5，l0，20，30，50μL，按層析條件點(diǎn)樣，展開(kāi)，掃描測(cè)定其峰面積，以點(diǎn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=503.26 一42.2l，r=0.99l 9，線性范圍為5.3～53μg／mL。
    掃描條件及有關(guān)參數(shù)的確定：將對(duì)照品斑點(diǎn)在200～370nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，其zui大吸收波長(zhǎng)為259 nm，確定測(cè)定波長(zhǎng)λ=259nm。掃描方式：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng)反射法鋸齒掃描，光源氘燈，線性參數(shù)為Sx=3，振幅為l0，背景校正。
    2 2 樣品溶液的制備
    分別精密稱取黃皮酰胺粗品、黃皮酰胺一次甲醇提取物、黃皮酰胺二次甲醇提取物1.02，1.02，1.06 mg，置10 mL量瓶中，分別加甲醇溶解，超聲振蕩30min，過(guò)濾，再加甲醇稀釋至刻度，搖勻即得。
    2，3 層析條件及方法
    取硅膠G（過(guò)240目篩）加0.5％CMC-Na（1：2.5）混合，研磨混勻超聲除去氣泡后，用自動(dòng)鋪板器鋪板，規(guī)格10cm×20 cm，厚度為0.6mm。室溫晾干，于105℃活化0.5h，置干燥器內(nèi)備用。展開(kāi)劑為置冰箱過(guò)夜的氯仿一甲醇（85：l5）的下層溶液，顯色劑為碘化鉍鉀：碘-碘化鉀（1：1）。
    在同一薄層板上，分別點(diǎn)黃皮酰胺粗品、黃皮酰胺一次甲醇提取物、黃皮酰胺二次甲醇提取物樣品溶液及黃皮酰胺對(duì)照品溶液各50μL，在上述層析條件下進(jìn)行展開(kāi)，展距為12.0cm，取出晾干，噴以顯色劑，自然陰干，于可見(jiàn)光下觀察結(jié)果，可見(jiàn)樣品溶液在相同Rf=0.76處分別與對(duì)照品溶液均有相同的棕紅色斑點(diǎn)。
    2，4 樣品含量測(cè)定
    分別精密吸取黃皮酰胺粗品、黃皮酰胺一次甲醇提取物、黃皮酰胺二次甲醇提取物樣品溶液各20μL，點(diǎn)于同一薄層板上，展開(kāi)定位后測(cè)定其峰面積，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算。結(jié)果黃皮酰胺粗品含量為（34.70±l.79）％ ，一次甲醇提取物含量為（47.55±1.91）％ ，二次甲醇提取物含量為（83.28±2.61）％ 。
    2 5 回收率試驗(yàn)
    分別精密吸取已知含量的黃皮酰胺二次甲醇提取物溶液3份各20μL，點(diǎn)于同一薄層板上，同時(shí)分別精密加入對(duì)照品溶液l0，20，30μL，展開(kāi)定位后掃描測(cè)定。
    2．6 精密度試驗(yàn)
    精密吸取對(duì)照品溶液20μL，點(diǎn)于薄層板上，展開(kāi)定位后，連續(xù)掃描5次。結(jié)果各次測(cè)得峰面積的RSD為1.16％（n=5）。
    2 7 穩(wěn)定性試驗(yàn)
    精密吸取對(duì)照品溶液20μL，點(diǎn)樣，展開(kāi)，定位，掃描測(cè)定峰面積，從15 min起測(cè)定，每隔30min測(cè)定1次，直至2h。結(jié)果對(duì)照品溶液在2h內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD為1.7l％。
    3 討論
    3 1 試驗(yàn)中采用薄層色譜法，所用展開(kāi)劑系統(tǒng)是經(jīng)過(guò)多次選擇確定的，所展出的斑點(diǎn)基本無(wú)拖尾， 適當(dāng)，穩(wěn)定性好，利于掃描測(cè)定。
    3 2 從方法的精密度和線性關(guān)系考察及加樣回收試驗(yàn)的結(jié)果來(lái)看，樣品在點(diǎn)樣范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈線性關(guān)系。TLCS法重現(xiàn)性、準(zhǔn)確度好。
參考文獻(xiàn)：
【1】楊明河，曹延懷，李偉勛，等，黃皮葉中黃皮酰胺的分離和結(jié)構(gòu)測(cè)定【J】藥學(xué)學(xué)報(bào)，1987，22（1）：33—40
【2】饒爾昌，程家寵，楊光中，等，黃皮酰胺的合成【J】，藥學(xué)學(xué)報(bào)，1994，29：502，