1、ELISA技術原理

將抗原抗體的特異性免疫反應與酶的催化反應相結合的免疫檢測技術，利用酶標技術標記抗原或抗體，通過顯色反應，用以檢測相應的抗體或抗原，對其進行定性或定量分析。

① 將已知的抗原或抗體通過物理吸附于固相載體表面，并保持其免疫學活性；

② 利用酶標技術使抗原或抗體與酶形成酶結合物，并保持酶標抗原或抗體的免疫活性及酶的活性；

③ 酶結合物與相應的抗原或抗體結合后，加入底物，底物被酶催化顯色，依據底物顏色反應及深淺判斷待測物中相應抗體或抗原的量。

2. 三種必要的試劑：

在這種測定方法中有3種必要的試劑：

① 固相的抗原或抗體（免疫吸附劑）

② 酶標記的抗原或抗體（標記物）

③ 酶作用的底物（顯色劑）

3. ELISA四種常用的方法

ELISA可用于測定抗體,也可用于檢測抗原。根據檢測目的和操作步驟不同,有四種類型的常用方法：間接法、雙抗體夾心法、雙抗原夾心法、競爭法。

3.1、間接法（此法是測定抗體經常用的方法）

將已知抗原吸附于固相載體,加入待檢標本(含相應抗體)與之結合。洗滌后,加入酶標抗球蛋白抗體(酶標抗抗體)和底物進行測定。

3.2、雙抗體夾心法（此法常用于測定抗原）

將已知抗體吸附于固相載體、加入待檢標本(含相應抗原)與之結合。溫育后洗滌,加入酶標抗體和底物進行測定。

3.3、雙抗原夾心法（此法多用于乙肝抗體檢測）

將已知抗原吸附于固相載體、加入待檢標本(含相應抗體)與之結合。溫育后洗滌,加入酶標抗原和底物進行測定。

3.4、競爭法（此法可用于抗原和半抗原的定量測定，也可用于測定抗體）

以測定抗原為例，將持異性抗體吸附于固相載體;加入待測抗原和一定量的酶標已知抗原,使二者競爭與固相抗體結合;經過洗滌分離,最后結合于固相的酶標抗原與待測抗原含量呈負相關。

4.ELISA四種檢測方法的比較