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血清不穩(wěn)定原因及應(yīng)對(duì)解決方案

來源:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司   2024年05月13日 15:30  
  血清,指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白分離 出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長(zhǎng)因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。血清在細(xì)胞培養(yǎng)中提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需的生長(zhǎng)因子、激素、各種蛋白、促進(jìn)貼壁和鋪展的因子、細(xì)胞傳代時(shí)蛋白酶抑制劑和其他多種不明營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),以胎牛血清(FBS)的使用最為普遍,其他血清類型還包括小牛血清、成牛血清、馬血清、羊血清、雞血清、兔血清等,其營(yíng)養(yǎng)類型有很大差異,適用于不同類型細(xì)胞。
 
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  血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量zui大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份,具有極為重要的功能:
 
  1、提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。
 
  2、提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
 
  3、有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。
 
  4、是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。
 
  5、起酸堿度緩沖液作用。
 
  6、提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。
 
  血清最大的劣勢(shì)就是不穩(wěn)定,不穩(wěn)定原因如下:
 
  1、來源不穩(wěn)定
 
  以胎牛血清為例,懷孕母牛在屠宰前腹部被剖開,取出胎牛,在低溫?zé)o菌條件下,刺破胎牛的心臟以獲取血清。就這一條,動(dòng)物倫理組織就可以把你攔住嘮嘮。另外,牛血清必須來自有文件證明無(wú)牛海綿狀腦病的牛群或國(guó)家,我國(guó)在對(duì)牛血清的質(zhì)量《中國(guó)生物制品主要原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) 2000》中提出比較嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)要求,包括蛋白質(zhì)含量,細(xì)菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細(xì)菌內(nèi)毒素,細(xì)胞增殖支持等檢查。
 
  2、組分不穩(wěn)定
 
  還有最讓人鬧心的,動(dòng)物血清成分復(fù)雜,其組分及含量常和動(dòng)物性別(公胎牛,母胎牛,如激素)、年齡、生理狀態(tài)、營(yíng)養(yǎng)條件不同而有差異,是不是覺得特像中藥。還有,盡管血清大部分成分是已知的,但仍然存在不清楚的組分,所以導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)化極其困難。所以,師兄師姐經(jīng)常會(huì)告訴你說,不同生產(chǎn)廠家的血清差異很大,就是同一廠家生產(chǎn)的不同批次血清差異也很大。
 
  3、用法不穩(wěn)定
 
  實(shí)驗(yàn)習(xí)慣的不同,都可能導(dǎo)致細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不穩(wěn)定,比如,有人四度過夜融化,有人急性子,直接扔進(jìn)水浴鍋。新手拿到一瓶血清,第一個(gè)問題就是問自己,要不要滅活?度了一下答案,嚓,還是中藥,說啥的都有。還有,別忘了,血清同時(shí)含有內(nèi)毒素、血色素、補(bǔ)體、抗體等其他有害成分,影響細(xì)胞生長(zhǎng)甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡,對(duì)某些實(shí)驗(yàn)來說,極為重要。
 
  如此的不穩(wěn)定,該怎么在實(shí)驗(yàn)過程中盡可能的解決呢?
 
  1、土豪和有得選擇的實(shí)驗(yàn)室,請(qǐng)選擇無(wú)血清培養(yǎng)基。
 
  2、不要頻繁更換血清牌子,不同廠家血清來源,生產(chǎn)工藝,包裝運(yùn)輸?shù)榷加泻艽蟛町?,盡量不要更換牌子。
 
  3、選定品牌后,對(duì)于經(jīng)過測(cè)試過的好用的血清,同一個(gè)批次多囤積一些,計(jì)算本次實(shí)驗(yàn)的大概用量,然后在多加20%的儲(chǔ)備,放在-20或-80度保存。
 
  4、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)建議每個(gè)人用自己的培養(yǎng)基,PBS,胰酶等試劑以及用具,保持實(shí)驗(yàn)條件一致性,避免交叉污染,別給自己添堵,也別給別人添堵。
 
  5、如果實(shí)在要更換血清,先將細(xì)胞在新的血清里傳兩到三代,適應(yīng)新的條件后,細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
 

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