高效液相色譜儀的使用注意事項

一、開機前準備

• 流動相制備

  • 溶劑需使用色譜純級別（如甲醇、乙腈），水需為超純水（18.2MΩ?cm），避免雜質污染色譜柱或檢測器。

  • 流動相使用前必須通過 0.45μm（或 0.22μm）濾膜過濾，有機相用尼龍膜，水相用醋酸纖維膜，防止顆粒堵塞泵或色譜柱。

  • 流動相需脫氣處理：可采用超聲脫氣（20-30 分鐘）、在線脫氣機或氦氣鼓泡脫氣，避免氣泡導致基線波動或泵壓力不穩(wěn)。

• 系統(tǒng)檢查

  • 確認輸液泵、檢測器、進樣器等部件連接管路無漏液、松動，柱溫箱溫度設定符合方法要求（如常溫或 30-40℃）。

二、樣品處理

• 樣品前處理

  • 樣品需溶解，避免混懸顆粒，通過 0.22μm 或 0.45μm 濾膜過濾（針頭濾器），防止堵塞進樣閥或色譜柱。

  • 生物樣品（如血清、細胞裂解液）需離心（10000rpm 以上）后取上清液，必要時用蛋白沉淀劑（如乙腈）去除蛋白，避免柱污染。

• 樣品濃度與體積

  • 濃度不宜過高，避免檢測器飽和或色譜柱過載（峰展寬、拖尾），進樣量通常為 5-20μL（根據(jù)方法調整）。

三、儀器操作規(guī)范

• 泵系統(tǒng)操作

  • 開機后先用 10% 甲醇 / 水低流速（如 0.5mL/min）沖洗系統(tǒng) 10-15 分鐘，排除管路氣泡，再逐步升至目標流速，避免壓力驟升損壞泵組件。

  • 更換流動相時，需注意互溶性：例如從水相切換到正己烷前，需用異丙醇過渡沖洗，防止相分離堵塞系統(tǒng)。

• 進樣器使用

  • 手動進樣時，進樣針需用樣品溶液潤洗 3-5 次，進樣后迅速切換閥位，避免空氣進入系統(tǒng)；自動進樣器需定期清潔進樣針和樣品盤，防止交叉污染。

• 色譜柱維護

  • 新柱使用前需按說明書用合適溶劑平衡（如 C18 柱用 100% 甲醇沖洗 30 分鐘），避免直接用純水沖洗反相柱（可能導致填料塌陷）。

  • 分析完畢后，用高比例有機相（如 90% 甲醇 / 水）沖洗色譜柱 30 分鐘，去除殘留雜質，長期不用時需用純甲醇或乙腈封存，柱兩端加堵頭防止干燥。

• 檢測器操作

  • 紫外檢測器（UV）：開機后預熱 30 分鐘以上，確保光源穩(wěn)定；避免使用流動相在檢測波長下有強吸收（如 UV220nm 時避免用甲醇，可選乙腈）。

  • 示差折光檢測器（RID）：需嚴格控溫（±0.1℃），避免溫度波動影響基線；流動相需脫氣，防止氣泡干擾。

四、運行中監(jiān)控

• 壓力監(jiān)測

  • 實時關注柱壓變化：正常壓力波動應＜10%，若壓力驟升可能是柱堵塞（如樣品雜質沉積），需降低流速沖洗或反沖色譜柱；壓力驟降可能是管路漏液，需檢查接口密封。

• 基線與峰形觀察

  • 基線漂移超過 0.01AU 或出現(xiàn)異常波動，可能是流動相污染、檢測器污染或氣泡未除盡，需重新處理流動相或沖洗系統(tǒng)。

  • 峰形拖尾或分叉可能是柱效下降（填料污染）、樣品過載或流動相條件不合適，需優(yōu)化方法或更換色譜柱。

五、關機與維護

• 系統(tǒng)沖洗

  • 分析結束后，按以下步驟沖洗系統(tǒng)：

  • 泵和進樣器管路若使用緩沖鹽（如磷酸鹽），需先用 10% 甲醇 / 水沖洗 30 分鐘去除鹽結晶，再用純有機相沖洗，避免鹽析出堵塞管路。

  1. 用流動相（不含樣品）沖洗 10-15 分鐘，清除殘留樣品；

  2. 反相色譜柱用 10% 甲醇 / 水沖洗 30 分鐘，再用 100% 甲醇沖洗 30 分鐘封存；正相色譜柱用正己烷沖洗后封存。

• 部件保養(yǎng)

  • 定期更換泵密封墊（每 1000 小時或出現(xiàn)漏液時）、進樣器針座（每 5000 次進樣），清洗檢測器流通池（用 10% 硝酸水溶液沖洗，再用水和甲醇沖洗）。

  • 色譜柱長期不用時，需記錄使用時間和狀態(tài)，避免高溫或強光直射。

六、安全與環(huán)保

• 溶劑安全

  • 操作有機溶劑時需在通風櫥中進行，避免吸入乙腈、四氫呋喃等揮發(fā)性毒物，接觸皮膚后立即用大量清水沖洗。

• 廢液處理

  • 含重金屬（如離子對試劑）或有毒溶劑（如氯仿）的廢液需分類收集，交由專業(yè)機構處理，避免直接排放。

七、常見問題應對

• 柱壓過高：可能是色譜柱污染或篩板堵塞，可嘗試用 10% 異丙醇水溶液低流速（0.3mL/min）反沖色譜柱，或更換保護柱（預柱）減少主柱污染。

• 基線噪聲大：檢查檢測器燈能量（UV 燈壽命通常 2000 小時）、流動相是否變質，或流通池中有氣泡（可加大流速沖洗）。

總結

高效液相色譜儀的規(guī)范使用需貫穿 “防污染、控壓力、穩(wěn)條件” 原則，從流動相制備到儀器維護的每個環(huán)節(jié)精細化操作，既能延長設備壽命，又能保證分析結果的可靠性。新手操作時建議先熟悉儀器說明書，結合標準方法進行驗證，遇到故障時按 “系統(tǒng)排查 - 部件優(yōu)化 - 專業(yè)維修” 的步驟處理。

島津高效液相色譜儀值得信賴嗎？