一、前期準備與空消
1、設(shè)備檢查：確認罐體、管路(空氣/蒸汽/冷卻水/排污)、閥門密封性及電源連接正常，攪拌系統(tǒng)無異常。
2、空罐滅菌(空消)：通入飽和蒸汽(121°C)對罐體及管路滅菌20分鐘，結(jié)束后通無菌空氣保壓(0.15MPa)，防止污染。
3、培養(yǎng)基添加：將滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基加入罐內(nèi)，定容至目標體積(如50L)。
二、實消與參數(shù)設(shè)置
1、實罐滅菌(實消)：再次通蒸汽(121°C，20分鐘)徹底滅菌培養(yǎng)基，結(jié)束后維持無菌環(huán)境保壓。
2、參數(shù)校準：校正pH電極和溶氧電極(DO)，滿刻度校準溶氧值至100%。設(shè)定溫度、攪拌轉(zhuǎn)速范圍(如200-800r/min)、pH目標值(如7.0)及補料聯(lián)動參數(shù)。
三、接種操作
1、無菌環(huán)境控制：關(guān)閉門窗及通風(fēng)設(shè)備，減少空氣流動。操作人員佩戴無菌手套，用酒精棉擦拭接種口。
2、火焰圈接種：點燃火焰圈保護接種口，在火焰掩護下拔除護套，通過壓差法(罐壓0.15MPa→0.05MPa波動)將種子液快速接入罐內(nèi)，立即密封。
四、發(fā)酵過程控制
1、環(huán)境維持：保持恒溫(如37°C)、穩(wěn)定攪拌(根據(jù)菌種需求)、通氣量(如1VVM)，自動補加酸堿/消泡劑。
2、監(jiān)測與記錄：每小時記錄pH、DO、溫度、罐壓；定期取樣檢測菌體濃度及雜質(zhì)；觀察泡沫情況，及時添加消泡劑。
五、結(jié)束與清洗
1、放料：發(fā)酵完成后通知下游工序，蒸汽吹洗管道后開啟出料閥排出發(fā)酵液。
2、罐體清洗：高壓水槍沖洗罐壁，頑固殘留用10%堿液90°C煮洗30分鐘；排污后通風(fēng)干燥。
3、電極保養(yǎng)：pH電極用3mol/L KCl溶液浸泡，DO電極通電維護。
4、檢修試漏：罐體保壓0.15MPa，用肥皂水檢測閥門/法蘭密封性，更換損壞墊片。
關(guān)鍵注意事項：全程嚴格無菌操作，避免雜菌污染；電極校準直接影響工藝精度；火焰圈接種需快速精準，防止罐壓歸零。
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