尋求改進(jìn)質(zhì)量和提高效率的藥品生產(chǎn)商對使用Sievers^® 總有機(jī)碳（TOC）分析儀進(jìn)行清潔驗(yàn)證的興趣越來越濃。大多數(shù)制藥或生物科技廠家目前都配有TOC分析儀以符合美國藥典USP、中國藥典ChP的水檢測要求，以放行純化水或注射用水用于清潔或生產(chǎn)過程。因此，大多數(shù)廠家已經(jīng)擁有用于清潔驗(yàn)證的TOC測定方法。

1996年，國際協(xié)調(diào)會議（ICH）在FDA（CDER & CBER^②）的協(xié)助下，創(chuàng)建了指導(dǎo)文件《Q2B：分析步驟的驗(yàn)證》。該文檔的目的是為制藥公司如何考慮清潔驗(yàn)證分析程序的各種驗(yàn)證特征提供參考。本文提供了與下列參數(shù)相關(guān)的多個(gè)實(shí)例，這些實(shí)例均與TOC方法驗(yàn)證有關(guān)，因而此應(yīng)用說明呼應(yīng)了Q2B指導(dǎo)文件：

• 檢出限和定量限
  

• 確定分析物的準(zhǔn)確度和精確度
  

• 線性和回收百分比
  

• 分析方法的穩(wěn)固性^③
  

檢出限和定量限

檢出限（LOD）用于評估何時(shí)信號是儀器噪音的結(jié)果還是化合物的反應(yīng)。LOD被視為樣本中分析物的檢測量，但沒有必要的足夠的統(tǒng)計(jì)確定性來定量。

確定分析物的準(zhǔn)確度和精確度

了解TOC分析方法驗(yàn)證中準(zhǔn)確度和精確度的區(qū)別非常重要。準(zhǔn)確度與測得值和分析物的真實(shí)值的接近程度相關(guān)。通常，準(zhǔn)確度是計(jì)算儀器驗(yàn)證時(shí)測得的標(biāo)準(zhǔn)品的TOC濃度與預(yù)期的標(biāo)準(zhǔn)品TOC濃度的差值百分比（即+7%）所得。

線性和回收百分比驗(yàn)證

通常，線性測試校驗(yàn)儀器反應(yīng)值是否與所研究分析物的濃度具有線性關(guān)系。圖1演示了TOC濃度范圍從1.00 ppm到7.50 ppm，牛血清白蛋白（BSA）的線性關(guān)系，其中含低TOC水的小瓶中加了已知濃度的BSA。這個(gè)例子演示了理論濃度（x軸）對所測得的濃度（y軸）作圖所得到的兩者之間的線性關(guān)系，y=(m)x+b。分析儀的反應(yīng)值與所研究化合物的相關(guān)系數(shù)（R2）應(yīng)大于0.97。

分析方法的穩(wěn)固性

與實(shí)際回收率同樣重要的是，用于確定所研究化合物回收百分比的TOC分析方法的重現(xiàn)性或穩(wěn)健性。在清潔驗(yàn)證方法開發(fā)中穩(wěn)固性是指結(jié)果不受方法中參數(shù)、或樣本之間的小而微妙的變化的影響的能力。還提供了正常使用期間的可靠性指示（例如各個(gè)分析員的取樣方法）。若希望得到高回收率，回收率一直保持可重復(fù)性也同等重要或更為重要，并在整個(gè)方法開發(fā)期間一直需要對回收率進(jìn)行檢測。表1和表2提供了CIP-100棉簽回收率分析信息，由兩個(gè)不同的分析員測試樣本間的變化。

要考慮的最后幾點(diǎn)

評估制藥產(chǎn)品質(zhì)量水平的測試步驟要遵從各項(xiàng)要求。具體到清潔驗(yàn)證來說，當(dāng)前的藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范［21 CFR 211.194(a)] 要求，用于評估藥品是否符合已建立規(guī)范的測試方法必須滿足準(zhǔn)確度和可靠性的合適標(biāo)準(zhǔn)^⑦。