目的：采用液相色譜法測定了清火梔麥膠囊的含量并對其進 行穩(wěn)定性考察。方法：用液相色譜法對其中的指標成分穿心蓮內(nèi)酯 進行了含量測定。紫外檢測波長為λ225nm。加速穩(wěn)定性試驗環(huán)境：39℃，相對濕度75%，每 月考核1次。結(jié)果和結(jié)論：本品含測結(jié)果準確，精密度、回收率、重現(xiàn)性 均較好，經(jīng)加速穩(wěn)定性試驗，放置3個月后，穿心蓮內(nèi)酯含量下降了約50%。
關(guān)鍵詞　清火梔麥膠囊；液相色譜法；穿心蓮內(nèi)酯；質(zhì)量穩(wěn)定性

Determination of andrographolide in Qinghuozhimai
capsules and examination of its quality stability by HPLC

Huang Jie
（Guangxi Institute for Drug Control,Nanning 530021）

ABSTRACT　OBJECTIVE：To establish a method for determinat ion of andrographolide in Qinghuozhimai capsules（QHZMC） and examine the quality stability of QHZMC.METHODS:The content of andrographolide in QHZMC w as determined by HPLC.QHZMC was stored for 3 months at the temperature of 38～40 ℃ with relative humidity of 75%.Andrographolide was assayed every month.R ESULTS:Linear range was 0.20～1.23μg（r=0.9994）.The average re covery rate was 97.89% with RSD=2.3%（n=6）.The content of andrographolide in QHZMC was decreased by 53% within 3 months.CONCLUSION: The HPLC method can be used for determinationg of andrographolide in QHZMC .The quality of QHZMC is not stable.
KEY WORDS　qinghuozhimai capsules,HPLC,andrographolide,quality stability

　　清火梔麥膠囊為南方地區(qū)常用的中成藥，由穿心蓮、梔子、麥冬三 味組成，具清熱解毒，涼血消腫之功效，收載于衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第9冊（1994年 ）。為了進一步探討和完善質(zhì)量控制指標，本文采用液相色譜法對君藥穿心蓮所含穿心 蓮內(nèi)酯（andrographolide）進行了含量測定研究，并對其進行了穩(wěn)定性考察。

1　儀器與藥品

　　Waters液相色譜儀:490E型多功能紫外檢測器，510型泵，745型處理機,U6K進樣器。
　　穿心蓮內(nèi)酯對照品（中國藥品生物制品檢定所），清火梔麥膠囊（廣西柳州市柳城制藥廠）。

2　方法與結(jié)果

2.1　試液的制備
　　對照品溶液：精密 稱取穿心蓮內(nèi)酯對照品適量，加甲醇使溶解并制成每1ml含200μg的溶液，作為對照品溶液 。
　　樣品溶液：取本品內(nèi)容物，混勻，取約2.5g,精密稱定，加無水乙醇50ml,超聲處理1h, 濾過，濾渣用無水乙醇洗滌3次，并入濾液中，蒸干，殘渣加氯仿-甲醇（7∶3）混合液使溶解，置5ml量瓶中，加混合液稀釋至刻度，搖勻，作為樣品原液。精密量取原液2 50μl點于硅膠GF254薄層板上，使成條狀，在樣品條斑側(cè)1.5cm處，隨行點穿心蓮內(nèi) 酯對照品（3mg/ml）5μl作對照。以氯仿-醋酸乙酯-無水乙醇（9∶6∶1）為展開劑，展開， 取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視（見圖1），刮取與穿心蓮內(nèi)酯對照品相對應(yīng)的條斑， 置5ml離心管中，精密加入甲醇5ml,攪拌10min,離心，取上清液，作為樣品溶液。
2.2　色譜條件及色譜行為
　　色譜柱：μBondpack C18,10μm,4×3 0mm（中國科學院大連化學物所）。流動相：甲醇-水（55∶45）；流速:1.0ml/min；檢測 波長:225nm;靈敏度:0.2AUFS;處理機1024;柱溫：室溫。在以上條件下，注入樣品溶液，塔 板 數(shù)以穿心蓮內(nèi)酯峰計大于2000,分離度大于2.1。



圖1　清火梔麥膠囊薄層色譜圖
1-供試品原液；2-穿心蓮內(nèi)酯對照品


2.3　陰性試驗
　　按清火梔麥膠囊的處方、工藝，不加穿心蓮，制成陰性 樣品，同樣品溶液的制備法制成陰性試液，進樣10μl,結(jié)果本品中穿心蓮之外的其它藥味對 穿心蓮內(nèi)酯峰無干擾，見圖2。




圖2　清火梔麥膠囊中穿心蓮內(nèi)酯HPLC圖
A-穿心蓮內(nèi)酯對照品；B-清火梔麥膠囊樣品；C-陰性樣品

2.4　穩(wěn)定性試驗
　　在選定條件下，注入樣品溶液，結(jié)果在6h內(nèi)基本穩(wěn)定, RSD=1.37%（n=8）。
2.5　線性范圍試驗
　　精 密吸取對照品溶液1,2,3,4,5,6和7ml,加甲醇稀釋并定容至10ml,精密吸取以上7種溶液各10 μl,分別注入液相色譜儀，以穿心蓮對照品濃度為自變量（X）,以穿心蓮內(nèi)酯峰面積為 應(yīng)變量（Y）,求得回歸方程:Y=189571X+543671,峰面積與濃度在20～140μg/ml范圍內(nèi) 呈良好線性關(guān)系（r=0.9994）。
2.6　精密度試驗
　　在選定 條件下，注入樣品溶液，連續(xù)進樣6次,RSD=0.61%。
2.7　回收率試驗
　　取已知含量的清火梔麥膠囊適量，加入一定量的穿心 蓮內(nèi)酯，按樣品溶液的制備及測定的方法試驗，結(jié)果平均回收率為97.89%,RSD =2.3%（n=6），見表1。

表1　穿心蓮內(nèi)酯回收率測定結(jié)果

測得量
/mg
加入量
/mg
樣品含量
/mg
回收率
/%
X
/%
RSD
/%

6.472
2.146
4.339
99.36

6.440
2.146
4.378
96.11

6.446
3.219
3.263
98.88
97.89
2.27

6.296
3.219
3.256
94.43

6.405
4.292
2.192
98.16

6.454
4.292
2.146
100.37


2.8　重現(xiàn)性試驗
　　按樣品的測定項下的方法測定950120批樣 品5次，平均含量為0.728mg/粒,RSD=0.93%。
2.9　樣品的測定
　　分別精密吸取濃度為60μg/ml的對照品溶液10μl,樣 品溶液10μl;注入液相色譜儀，測定，按外標法計算，即得。共測樣品10批，結(jié)果見表2。

表2　樣品的含量測定結(jié)果

批　號
測定量（mg/粒）
批　號
測定量（mg/粒 ）

950120　
0.672
950128
0.698

950207　
0.580
950 127
0.477

950127-2
0.480
950329
0.468

950403　
0.514
950408
0.452

950410　
0.529
950610
0.352


2.10　加速穩(wěn)定性試驗
　　將本品3批在上市包裝條件下，于 39℃和相對濕度75%保存，每月考核一次，連續(xù)3個月，對其穿心蓮內(nèi)酯的含量進行考察，結(jié) 果見表3。

表3　加速穩(wěn)定性考察結(jié)果

批　號
月份（mg/粒）
3個月內(nèi)損
失率/%

0
1
2
3

950120
0.728
0.576
0.350
0.340
53.3

950128
0.698
0.516
0.363
0.312
55.3

950207
0.580
0.507
0.398
0.282
49.7


3　討　論

3.1　本品經(jīng)加熱回流提取，所 溶出的雜質(zhì)較多，在定容中有部分殘渣難以轉(zhuǎn)移，故參照中國藥典1995年版一部“穿心蓮” 項下以超聲提取，經(jīng)比較超聲30,40和60min,結(jié)果以超聲60min提取zui為*，實驗證明，提 取1h后，加樣回收率為97.89%,測定值精密度和重現(xiàn)性均較好，表明穿心蓮內(nèi)酯已提取* 。
3.2　由于本品中含有穿心蓮生藥粉，經(jīng)無水乙醇提取后，所得的供 試液中含有大量的葉綠素及其他酯溶性雜質(zhì)，對液色譜分析柱污染嚴重；經(jīng)大孔樹脂吸 附后，以45%的乙醇洗脫，洗脫液濃縮后進樣，在樣品峰后仍有一雜質(zhì)峰，且保留時間過長（ 約30min）,故未采用?，F(xiàn)采用薄層色離的方法，刮取條斑洗脫后進樣，雜質(zhì)減少，每針的分 析時間縮短為10min左右，且陰性無干擾。
3.3　本品在室溫下放置3個月后測定，穿心蓮內(nèi)酯的含量無明顯變化。而 在39℃和相對濕度75%的環(huán)境下，每放置一個月，穿心蓮內(nèi)酯的含量相應(yīng)降低，放置3個月后 ，3批樣品穿心蓮內(nèi)酯的含量分別降低了53.3%,55.3%和49.7%,3批平均下降了53%,這與 文獻［徐禮（焱）/（木），沙世炎等編著.中草 藥有效成分分析法.北京：人民衛(wèi)生出版社，1984∶230.］中穿心蓮藥材中穿心蓮內(nèi)酯隨著 貯藏時間增長而顯著下降基本一致，至于穿心蓮內(nèi)酯在放置過程中作何轉(zhuǎn)化，有待進一步研究。