蔗糖（sucrose）含量試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法 50 管/48 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)

蔗糖（sucrose）含量試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定意義：

蔗糖是植物光合作用的主要產(chǎn)物，也是糖分運(yùn)輸和儲(chǔ)藏的主要形式。因此，測(cè)定蔗糖含量對(duì) 于植物糖代謝具有重要意義。此外，蔗糖含量是飲料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等產(chǎn)品質(zhì) 量控制的重要指標(biāo)之一。
測(cè)定原理：

先用堿與樣品共熱，破壞其中的還原糖。然后在酸性條件下將蔗糖水解生成葡萄糖和果糖， 果糖進(jìn)一步與間苯二酚反應(yīng)，生成有色物質(zhì)，在 480nm 下有特征吸收峰。 所需的
儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。
蔗糖（sucrose）含量試劑盒說(shuō)明書(shū)試劑的組成和配制：

提取液：液體 100ml×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存； 
試劑二：液體 2.5ml×1 瓶，4℃保存； 
試劑三：液體 40ml×1瓶，4℃保存； 
試劑四：液體 10ml×1 瓶，4℃保存； 
試劑五：粉劑 0.5g×1 瓶，常溫保存。
蔗糖提取：

稱取 0.1~0.2g 樣本，常溫研碎，加入 1mL 提取液，適當(dāng)研磨后快速轉(zhuǎn)移到離心管中，置于 80℃水浴鍋中 10min，振蕩 3~5 次，冷卻后，4000g，25℃離心 10min，取上清，加入
2mg 試劑五，80℃脫色 30min，再加入 1mL 提取液，4000g，25℃離心 10min，取上清液測(cè)定。
測(cè)定操作表（在 1.5mL EP 管中依次加入下列試劑）：

    試劑（μL）        空白管            標(biāo)準(zhǔn)管    測(cè)定管
                            
    樣本                        100
                            
    試劑一                    100    
                            
    蒸餾水        100                
試劑二    50    50        50
                
    混勻，沸水浴煮沸 5min 左右（蓋緊，防止水分散失）    
                
試劑三    700    700        700
試劑四    200    200        200

混勻，沸水浴 30min，冷卻后 480nm 處蒸餾水調(diào)零，空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管分別記為

A1、A2 和 A3。

蔗糖（sucrose）含量試劑盒說(shuō)明書(shū)蔗糖含量計(jì)算：

 1、按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算

蔗糖含量(mg/mg prot)=(C 標(biāo)準(zhǔn)管×V1×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷（V1×Cpr）= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr
此法需要自行測(cè)定蛋白濃度。
2、按照樣品質(zhì)量計(jì)算

蔗糖含量(mg/g 鮮重)=(C 標(biāo)準(zhǔn)×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=2×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W。 C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，1mg/mL；V1：加入樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，2mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。

注意：zui低檢測(cè)限為 100ng/g 鮮重或 1ng/mg prot