如何用水溶性Cy5 NHS ester標(biāo)記蛋白多肽？下面介紹一種水溶性Cy5 NHS ester標(biāo)記 (D-ser2)-leucineenkephalin實(shí)驗(yàn)操作步驟。

1. Cy5 NHS 1.0 mg溶解于400 μL DMSO后，加入到1mL 的玻璃瓶中盛有(D-ser2)-leucine- enkephalinacetate (YSGFLT，0.75 mg) 的400 μL DMSO溶液。（Dye 和peptide 投料比是 1:1）

2. 然后加入15 μL三乙胺，常溫避光攪拌反應(yīng)混合物過夜。

3. 用HPLC 純化蛋白，使用蛋白C18柱子(25 cm×10 mm)，每次上樣注入2×400 μL，30分鐘梯度洗脫。從0.1% TFA水溶液到MeCN∶H2O（0.1% TFA）=70∶30，流速4mL /min。（對(duì)不同的蛋白選擇不同的合適HPLC梯度流動(dòng)相）

4. 收集適當(dāng)?shù)纳珟Х?，?biāo)記多肽的保留時(shí)間比未標(biāo)記的多肽長(zhǎng)。

5. 產(chǎn)品冷凍干燥成粉末或在水溶液中，-20℃避光儲(chǔ)存；必要時(shí)可用質(zhì)譜表征。

6. CyDye標(biāo)記的蛋白穩(wěn)定性取決于蛋白本身。例如標(biāo)記的IgG在4 ℃可避光保存2月；更長(zhǎng)期的保存需加入等體積的甘油-20 ℃避光保存。

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