人表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒使用說明

　　BS-0182  人表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒

　　實驗原理

　　本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術(shù)，通過將純化的EGF捕獲抗體包被于微孔板形成固相抗體，依次加入樣本、標(biāo)準(zhǔn)品和HRP標(biāo)記的檢測抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后加入TMB底物顯色，在HRP酶催化下產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，酸化后轉(zhuǎn)為黃色，顏色深度與樣本中EGF濃度呈正相關(guān)，最終在450nm波長下測定OD值。

　　試劑盒組成與樣本處理

　　樣本類型?：適用于血清、血漿(EDTA/檸檬酸鹽/肝素抗凝)、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清及其他生物液體

　　樣本保存?：2-8℃可保存48小時，長期保存需-20℃或-70℃冷凍，避免反復(fù)凍融

　　樣本稀釋?：尿液至少需20倍稀釋(10μl樣本+190μl稀釋液)，血清/血漿可能需要預(yù)實驗確定稀釋倍數(shù)

　　標(biāo)準(zhǔn)品配制?：使用前加1ml蒸餾水配成20ng/ml溶液，通過系列倍比稀釋(從900μl稀釋液開始)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線

　　檢測程序

　　加樣?：空白孔加50μl稀釋液，其余孔加50μl標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣本，37℃孵育40分鐘

　　洗滌?：使用1×洗滌液充分洗滌4-6次，每孔350μl，每次浸泡1-2分鐘后拍干

　　加檢測抗體?：空白孔加100μl抗體稀釋液，其余孔加100μl生物素化抗體工作液，37℃孵育30分鐘

　　加SABC復(fù)合物?：每孔100μl，37℃孵育20分鐘

　　顯色?：加100μl TMB底物，37℃避光反應(yīng)10-20分鐘(顯色時間需根據(jù)實際情況調(diào)整)

　　終止與讀數(shù)?：每孔加100μl終止液，30分鐘內(nèi)在450nm波長測定OD值

　　技術(shù)參數(shù)

　　檢測范圍?：3.9-250pg/mL(典型范圍，不同品牌有差異)

　　靈敏度?：1.53-1.6pg/mL

　　重復(fù)性?：板內(nèi)變異系數(shù)<10%，板間變異系數(shù)<10%

　　特異性?：與人EGF類似物無明顯交叉反應(yīng)

　　注意事項

　　所有試劑使用前需恢復(fù)至室溫，液體組分充分混勻

　　嚴(yán)格避免泡沫產(chǎn)生和交叉污染，不同濃度樣本需更換槍頭

　　洗滌步驟對結(jié)果準(zhǔn)確性至關(guān)重要，需確保洗滌充分

　　底物溶液變?yōu)樗{(lán)色表明失效，不得使用

　　剩余板條應(yīng)立即密封保存于干燥環(huán)境，建議1個月內(nèi)用完

　　實驗廢棄物應(yīng)按傳染物規(guī)范處置

　　建議標(biāo)準(zhǔn)品和樣本做雙孔檢測，每次實驗都需建立標(biāo)準(zhǔn)曲線

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