以下是植物脂氧合酶(LOX)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明，綜合了相關(guān)檢測(cè)原理、操作步驟及注意事項(xiàng)：

　　BS-8002 植物脂氧合酶(LOX)ELISA試劑盒

　　檢測(cè)原理?

　　采用雙抗體夾心法：

　　微孔板預(yù)包被LOX抗體形成固相抗體

　　依次加入樣本、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物

　　TMB顯色后，顏色深淺與LOX活性呈正相關(guān)，450nm測(cè)OD值計(jì)算濃度

　　試劑盒組成?

　　預(yù)包被微孔板

　　標(biāo)準(zhǔn)品(通常含S0-S5濃度梯度)

　　HRP標(biāo)記抗體、TMB顯色液、終止液

　　濃縮洗滌液(需1:20稀釋)

　　樣本處理?

　　組織樣本?：按1:5~10(質(zhì)量:體積)加入提取液，冰浴勻漿后4℃ 15000g離心20min取上清

　　保存要求?：分裝后-20℃凍存，避免反復(fù)凍融;NaN3會(huì)抑制HRP活性，需避免使用

　　操作步驟?

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：按說(shuō)明書梯度稀釋(如0-320 U/L)

　　加樣?：

　　分別加入標(biāo)準(zhǔn)品、樣本各50μL至對(duì)應(yīng)孔

　　立即加入50μL HRP標(biāo)記抗體，37℃孵育60min

　　洗滌?：手工洗板需加滿洗滌液，靜置1min后甩干，重復(fù)5次

　　顯色?：

　　每孔加TMB底物100μL，37℃避光顯色15-30min

　　加終止液50μL，顏色由藍(lán)變黃

　　檢測(cè)?：450nm測(cè)OD值，用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度

　　注意事項(xiàng)?

　　試劑使用前需室溫平衡20分鐘，結(jié)晶需水浴溶解

　　顯色時(shí)間需嚴(yán)格控制，避免過度反應(yīng)

　　空白孔(S0)作為陰性對(duì)照，樣本OD值需在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)

　　結(jié)果計(jì)算?

　　樣本濃度=標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)應(yīng)濃度×稀釋倍數(shù)(若樣本預(yù)先稀釋需乘以相應(yīng)系數(shù))

　　如需具體試劑盒的差異步驟，請(qǐng)參考對(duì)應(yīng)產(chǎn)品的說(shuō)明書。

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