大鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)

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　　BS-2953  大鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA試劑盒

　　一、檢測(cè)原理

　　采用雙抗體夾心ELISA法：包被抗大鼠OxLDL抗體的微孔板中依次加入樣本和標(biāo)準(zhǔn)品，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，TMB顯色后顏色深淺與OxLDL濃度成正比。

　　二、試劑盒組成

　　主要組分?

　　預(yù)包被酶標(biāo)板(96孔或48孔)

　　標(biāo)準(zhǔn)品(凍干粉或液體，含不同濃度梯度)

　　酶標(biāo)抗體工作液(HRP標(biāo)記)

　　顯色液(TMB A/B液)

　　終止液(硫酸溶液)

　　濃縮洗滌液(20×或30×)

　　保存條件?

　　未開(kāi)封試劑盒需2-8℃保存，部分組分(如標(biāo)準(zhǔn)品)需-20℃凍存;開(kāi)封后酶標(biāo)板應(yīng)密封防潮。

　　三、樣本處理

　　樣本類(lèi)型?：血清、血漿(EDTA/肝素抗凝)、組織勻漿或細(xì)胞上清液。

　　處理方法?：

　　血清/血漿：3000轉(zhuǎn)/分離心10-20分鐘去除顆粒物。

　　組織勻漿：生理鹽水勻漿后離心取上清。

　　稀釋要求：部分試劑盒需用配套稀釋液按1:1或1:2預(yù)稀釋。

　　四、實(shí)驗(yàn)步驟

　　標(biāo)準(zhǔn)品配制?：凍干標(biāo)準(zhǔn)品需用稀釋液復(fù)溶，梯度稀釋為5-7個(gè)濃度(如5ng/ml至75ng/ml)。

　　加樣與孵育?：

　　每孔加入50μl標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育1小時(shí)。

　　洗滌3次后加入酶標(biāo)抗體，再次孵育30分鐘。

　　顯色與終止?：

　　加入TMB顯色液避光反應(yīng)10分鐘，后加終止液變黃色。

　　檢測(cè)?：450nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值，空白孔調(diào)零。

　　五、結(jié)果計(jì)算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣本濃度通過(guò)曲線方程計(jì)算后乘以稀釋倍數(shù)。

　　注意：高濃度樣本可能需二次稀釋以保證線性范圍。

　　六、注意事項(xiàng)

　　避免反復(fù)凍融樣本，解凍后需混勻。

　　洗滌需，防止非特異性結(jié)合。

　　顯色時(shí)間需嚴(yán)格控制，避免過(guò)度反應(yīng)。

　　不同批次試劑盒組分不可混用。

　　七、局限性

　　濃度樣本(超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍)需稀釋后重測(cè)。

　　注：以上資料僅供參考，僅限科研使用，不可用于臨床診斷。

　　如需具體操作細(xì)節(jié)，建議參考對(duì)應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)(如48孔/96孔配置可能步驟略有差異)。

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