以下是? 大鼠4-羥基雌二醇(4-OH-E2)ELISA試劑盒?的說明書核心內(nèi)容整理：

　　一、實(shí)驗(yàn)原理

　　采用?雙抗體夾心法?：

　　包被抗體固定于微孔板，捕獲樣本中的4-OH-E2抗原。

　　加入HRP標(biāo)記抗體形成復(fù)合物，TMB顯色后測定OD值(450nm)，濃度與顏色深度呈正相關(guān)。

　　二、試劑盒組成

　　組分 規(guī)格/說明

　　預(yù)包被微孔板 12孔×8條(96T)或48孔

　　標(biāo)準(zhǔn)品(400ng/L) 凍干粉，需用稀釋液重構(gòu)

　　酶標(biāo)試劑 HRP標(biāo)記抗體，6ml

　　顯色劑(TMB A/B液) 避光保存，現(xiàn)配現(xiàn)用

　　30倍濃縮洗滌液 使用前按1:29稀釋

　　三、樣本處理

　　血清/血漿?：

　　室溫凝固后離心(2000-3000轉(zhuǎn)/分，20分鐘)，避免溶血或NaN3污染。

　　分裝保存于-20℃，避免反復(fù)凍融。

　　組織勻漿?：按1:9比例與PBS冰上研磨。

　　四、操作步驟

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：

　　原倍標(biāo)準(zhǔn)品(400ng/L)梯度稀釋至12.5-200ng/L。

　　加樣與溫育?：

　　標(biāo)準(zhǔn)品/樣本各50μL，37℃孵育30分鐘。

　　洗滌?：

　　手工洗板5次，拍干(避免孔間交叉污染)。

　　顯色與終止?：

　　加TMB避光反應(yīng)10-20分鐘，終止后15分鐘內(nèi)檢測。

　　五、注意事項(xiàng)

　　質(zhì)量控制?：

　　復(fù)孔檢測，批內(nèi)CV<10%。

　　顯色時間需嚴(yán)格統(tǒng)一。

　　干擾因素?：

　　避免使用含NaN3或強(qiáng)氧化劑的樣本。

　　六、技術(shù)參數(shù)

　　項(xiàng)目 參數(shù)

　　檢測范圍 12.5-200ng/L(或2-64pg/mL)

　　靈敏度 ≤6ng/L

　　有效期 6個月(2-8℃保存)

　　完整操作請以試劑盒內(nèi)附說明書為準(zhǔn)，不同品牌可能存在差異。

　　注：以上資料僅供參考，完整操作請以試劑盒內(nèi)附說明書為準(zhǔn)。