以下是雞孕酮(PROG)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)的核心內(nèi)容及操作要點(diǎn)，綜合整理自多個(gè)廠商資料及技術(shù)文檔?：

　　一、試劑盒基本信息?

　　檢測(cè)原理?：雙抗體夾心法(主流)或競(jìng)爭(zhēng)法，通過(guò)HRP酶催化TMB顯色，450nm波長(zhǎng)測(cè)OD值定量?。

　　檢測(cè)范圍?：通常為78-5000pg/mL或100-2500pmol/L(不同品牌有差異)?。

　　樣本類(lèi)型?：適配雞血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清等，需避免反復(fù)凍融?。

　　二、關(guān)鍵組分清單?

　　組分? ?作用? ?保存條件?

　　包被微孔板 預(yù)固相化抗體，捕獲抗原 2-8℃干燥保存?

　　HRP標(biāo)記檢測(cè)抗體 與抗原結(jié)合，催化顯色反應(yīng) 避光4℃?

　　TMB底物液 顯色劑(A/B液需1:1混合) 避光4℃?

　　終止液(稀硫酸) 終止反應(yīng)，穩(wěn)定黃色產(chǎn)物 室溫?

　　三、樣本處理規(guī)范?

　　血清/血漿?：

　　全血室溫靜置2小時(shí)或4℃過(guò)夜，1000g離心20分鐘取上清?。

　　抗凝劑推薦EDTA或肝素，避免使用NaN3(抑制HRP活性)?。

　　組織勻漿?：

　　按1:9(重量:體積)加入PBS勻漿，5000g離心10分鐘取上清?。

　　細(xì)胞上清?：

　　分泌性成分直接離心收集;胞內(nèi)成分需反復(fù)凍融裂解細(xì)胞?。

　　四、實(shí)驗(yàn)步驟概要?

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：凍干品用1mL稀釋液復(fù)溶，梯度稀釋至7個(gè)濃度(如5000pg/mL→78pg/mL)?。

　　加樣溫育?：

　　每孔依次加入樣本/標(biāo)準(zhǔn)品50μL→檢測(cè)抗體50μL，37℃孵育1小時(shí)?。

　　洗滌?：

　　使用30倍稀釋的濃縮洗滌液，每孔300μL洗5次，拍干?。

　　顯色與終止?：

　　加入TMB底物100μL，避光反應(yīng)15分鐘→加終止液50μL?。

　　五、注意事項(xiàng)?

　　質(zhì)量控制?：批內(nèi)CV<10%，批間CV<12%為合格?。

　　干擾規(guī)避?：溶血、脂血樣本需預(yù)處理;細(xì)菌污染易致假陽(yáng)性?。

　　數(shù)據(jù)擬合?：建議使用四參數(shù)邏輯曲線(4PL)計(jì)算濃度?。

　　六、技術(shù)支持?

　　部分廠商提供代測(cè)服務(wù)(如BUNSEN本生)及實(shí)驗(yàn)問(wèn)題咨詢?。

　　如需完整說(shuō)明書(shū)，可聯(lián)系供應(yīng)商獲取PDF文檔(例：雞孕酮檢測(cè)說(shuō)明書(shū))?。

　　注：以上資料僅供參考，如需進(jìn)一步技術(shù)支持，可聯(lián)系供應(yīng)商獲取服務(wù)或?qū)嶒?yàn)指導(dǎo)?。