人腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)核心內(nèi)容如下：

　　BS-0120人腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒

　　一、實(shí)驗(yàn)原理?

　　采用?雙抗體夾心法?檢測(cè)TNF-β濃度：

　　包被抗體?：微孔板預(yù)包被抗人TNF-β單克隆抗體。

　　抗原結(jié)合?：樣本或標(biāo)準(zhǔn)品中的TNF-β與固相抗體結(jié)合，形成復(fù)合物。

　　酶標(biāo)抗體反應(yīng)?：加入HRP標(biāo)記的二抗，與抗原結(jié)合形成“抗體-抗原-酶標(biāo)抗體”復(fù)合物。

　　顯色與定量?：TMB底物顯色(藍(lán)色→黃色)，450nm測(cè)OD值，濃度與顏色深淺正相關(guān)。

　　二、試劑盒組成?

　　預(yù)包被微孔板

　　標(biāo)準(zhǔn)品(如180、120、60、30、15 ng/L梯度)

　　HRP標(biāo)記檢測(cè)抗體

　　樣本稀釋液、洗滌液、顯色液(TMB)、終止液

　　三、樣本處理要求?

　　樣本類(lèi)型 處理方法 保存條件

　　血清? 3000g離心10min，取上清 -20℃避免凍融

　　血漿? EDTA/肝素抗凝，3000g離心30min -20℃保存

　　細(xì)胞上清? 3000g離心10min去除顆粒 -20℃分裝保存

　　注意?：避免溶血、脂血或NaN3干擾。

　　四、操作步驟?

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：2倍梯度稀釋(如180→15 ng/L)，每孔50μL。

　　加樣?：樣本稀釋5倍后加樣(40μL稀釋液+10μL樣本)。

　　溫育?：37℃孵育30分鐘。

　　洗滌?：洗滌3-5次，去除未結(jié)合物質(zhì)。

　　顯色與終止?：TMB避光顯色15分鐘，加終止液變黃。

　　五、結(jié)果計(jì)算?

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　樣本濃度通過(guò)曲線方程計(jì)算，靈敏度通?！?.68 pg/mL。

　　六、注意事項(xiàng)?

　　試劑保存?：2-8℃避光，有效期6個(gè)月。

　　避免污染?：移液器槍頭需更換，避免交叉污染。

　　顯色控制?：顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能導(dǎo)致假陽(yáng)性。

　　注：以上資料僅供參考，如需進(jìn)一步了解ELISA操作步驟或樣本處理方法，可參考試劑盒說(shuō)明書(shū)。

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