犬白細胞分化抗原6(CD6)ELISA試劑盒實驗使用說明書

　　一、實驗原理

　　本試劑盒采用雙抗體夾心法檢測犬CD6抗原：

　　包被抗體：微孔板預包抗CD6單克隆抗體，特異性捕獲樣本中的CD6抗原。

　　生物素標記抗體：加入生物素標記的多克隆抗體，與已結(jié)合的CD6形成“夾心”結(jié)構(gòu)。

　　酶聯(lián)反應：通過HRP標記的鏈霉親和素與生物素結(jié)合，催化底物TMB顯色，吸光度(OD值)與CD6濃度成正比。

　　二、試劑與材料

　　試劑組分：

　　預包被微孔板(96T/48T)

　　CD6標準品(濃度梯度)

　　生物素化抗體、HRP-鏈霉親和素

　　TMB底物液、終止液、洗滌液(20×濃縮) 。

　　儀器：酶標儀(450 nm)、微量移液器、恒溫箱(37℃)、離心機。

　　三、操作步驟

　　樣本處理：

　　血清/血漿：室溫凝固后離心(2000×g，15分鐘)，取上清。

　　細胞培養(yǎng)上清：直接離心去除顆粒物。

　　組織勻漿：加PBS勻漿后離心取上清。

　　檢測流程：

　　加樣：每孔加入100μL標準品或樣本，37℃孵育1小時。

　　洗滌：棄液后，用洗滌液洗板3次，拍干。

　　加酶標抗體：加入100μL生物素化抗體，37℃孵育30分鐘。

　　顯色：加入TMB底物，避光反應15分鐘，終止液終止反應。

　　結(jié)果計算：

　　以標準品濃度(pg/mL)為橫坐標，OD值為縱坐標繪制標準曲線，樣本濃度通過曲線方程計算。

　　四、注意事項

　　試劑保存：未開封試劑盒2-8℃保存，避免反復凍融;濃縮洗滌液需37℃溶解鹽結(jié)晶.

　　干擾因素：避免樣本溶血、高濃度脂血或反復凍融.

　　質(zhì)量控制：每個樣本設復孔，標準品CV值應<10%.

　　五、技術(shù)參數(shù)

　　靈敏度：檢測限≤1.0 pg/mL。

　　線性范圍：1.56–100 pg/mL .

　　注：以上資料僅供參考，具體其他信息請咨詢技術(shù)老師或品牌供應商。

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