【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/span>

通過制片與觀察加深理解細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、吞噬等生理活動(dòng)。

【實(shí)驗(yàn)用品】

一、材料和標(biāo)本 雄性蟾蜍、小白鼠、l％雞血懸液、6％淀粉肉湯、草履蟲。

二、器材和儀器 光鏡、2ml 注射器、載玻片、蓋玻片、解剖器材、滴管、移液管、試

管、玻璃片、黑紙。

三、試劑 0.3％臺(tái)盼蘭、1％剛果紅。

【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】

一、細(xì)胞的吞噬活動(dòng)

（一）原理

白細(xì)胞是機(jī)體防御系統(tǒng)中能游走的單位。它分為粒細(xì)胞系、單核細(xì)胞系、淋巴系三類。

它們有許多生理功能，如游走性、變形運(yùn)動(dòng)、趨化性、吞噬異物等。在白細(xì)胞中，以粒細(xì)

胞、單核細(xì)胞的吞噬活動(dòng)較強(qiáng)，故稱此二類細(xì)胞為吞噬細(xì)胞。單核細(xì)胞由血液進(jìn)入組織后

逐漸演變成巨噬細(xì)胞。吞噬細(xì)胞主要靠吞噬來處理異物。吞噬細(xì)胞首先由于趨化作用而向

異物游走，然后伸出偽足包圍異物，并發(fā)生內(nèi)吞作用形成吞噬泡將異物吞入細(xì)胞，繼而溶

酶體與吞噬泡融合消化異物。

（二）小白鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活動(dòng)的觀察

l．實(shí)驗(yàn)前二天，每天向小鼠腹腔注射 6％淀粉肉湯 O．5～1ml（含 O．3％臺(tái)盼蘭，起標(biāo)

記作用），以刺激腹腔產(chǎn)生較多的巨噬細(xì)胞（此步由教師在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行完畢）。

2．實(shí)驗(yàn)時(shí)，每組取一只經(jīng)上述處理的小鼠，腹腔注射 1％雞血懸液 0．5～1ml，注射

后輕揉小鼠腹部以使紅細(xì)胞懸液分散均勻。

3．1 小時(shí)后，用頸椎脫位法處死小鼠，迅速剖開小鼠腹壁，向腹腔注入 O．5ml～1ml

生理鹽水，用牙簽輕輕攪拌使生理鹽水與腹腔液混勻。

4．用注射器抽取腹腔液，滴片，然后蓋上蓋片。

5．鏡檢，高倍鏡下畫圖記錄所見結(jié)果。

二、暗視野觀察細(xì)胞的纖毛和鞭毛運(yùn)動(dòng)

（一）原理

暗視野照明法是一種不使照射被檢物體的光線直接進(jìn)入物鏡的照明方法。常常用它來

觀察沒有染色的活體細(xì)胞或膠體粒子。利用此照明法，在鏡檢時(shí)不能直接看到通過標(biāo)本的

照明光線，只有被檢物體反射或衍射的光線進(jìn)入物鏡可以提高分辨率，在暗視野中可以看

到明亮的被檢物體的存在和運(yùn)動(dòng)，但它們的內(nèi)部結(jié)構(gòu)卻看不清楚。

（二）自制遮光板變普通顯微鏡為“簡單的暗視野顯微鏡”。

步驟：

1．將顯微鏡聚光器調(diào)到zui高位，用低倍鏡調(diào)焦至清楚。

2．取下目鏡，從鏡筒中觀察并調(diào)節(jié)光圈的大小，使其與鏡筒中所見物鏡的視野相等。

3．放一塊透明玻璃于載物臺(tái)透光孔上，用尺子測量光圈孔徑。

4．按照圖 6--1 的形狀，用黑紙剪成與調(diào)節(jié)后光圈孔徑一樣大小的*遮光板。

5．將*遮光板放置在顯微鏡的濾光框上，即可進(jìn)行標(biāo)本的暗視野觀察。

注：如果使用高倍鏡觀察標(biāo)本時(shí)，應(yīng)按高倍鏡調(diào)焦的視野大小重新制作*遮光板。

8

圖 6—1 *遮光板

a．光圈孔徑

b．濾光片直徑

（三）觀察蟾蜍上頜粘膜上皮細(xì)胞的纖毛運(yùn)動(dòng)

步驟：

1．用搗毀腦脊髓的方法處死蟾蜍。

2．腹部向上將蟾蜍固定在蠟盤上。

3．沿蟾蜍二側(cè)口角向后剪開約 l 厘米，將下頜翻轉(zhuǎn)固定在腹部。

4．在上頜中線距喉頭 1 厘米處放置臘屑，觀察臘屑向什么方向移動(dòng)？記錄臘屑開始移

動(dòng)到消失的時(shí)間（見圖 6--2 蟾蜍口腔內(nèi)面圖）。

5．然后，用眼科剪刀剪取咽頭前部的上頜粘膜約 2×2cm 2 小塊，用牙簽挑取剪下的粘

膜，將縱切面貼于載片上。

6．加一滴生理鹽水于載玻片標(biāo)本上，加蓋玻片，鏡檢。

圖 6—2 蟾蜍口腔內(nèi)面圖

結(jié)果：

1．在低倍鏡下觀察上頜粘膜細(xì)胞纖毛運(yùn)動(dòng)的現(xiàn)象。

2．換高倍鏡仔細(xì)觀察纖毛有規(guī)律的運(yùn)動(dòng)。

（四）暗視野觀察蟾蜍精子的鞭毛運(yùn)動(dòng)

步驟：

l．將前面實(shí)驗(yàn)所用蟾蜍沿腹中線開腹，暴露出黃色圓柱狀精巢。

2．剪取一側(cè)精巢于盛有自來水的平皿中，用鑷子夾住精巢的一端，清洗去血污。

3．移取洗凈的精巢于另一干凈的平皿上，用眼科剪將精巢充分剪碎后，加入數(shù)滴自來

水混勻。

4．用吸管吸取平皿內(nèi)液體，滴一滴于載玻片上，蓋上蓋玻片，稍待 2～3 分鐘于鏡下

觀察。

9

結(jié)果：

1．在低倍鏡下可見到視野中有許多精子：頭部呈長錐形，尾為細(xì)長的線狀結(jié)構(gòu)。

2．置高倍鏡下觀察：可見有許多靠尾部鞭毛彎曲擺動(dòng)驅(qū)使而運(yùn)動(dòng)的精子，測量鞭毛長

度。

三、草履蟲纖毛運(yùn)動(dòng)及食物泡的形成

圖 6—3 草履蟲

草履蟲是一種單細(xì)胞動(dòng)物。蟲體由一個(gè)細(xì)胞組成，能執(zhí)行復(fù)雜的生理功能。

其體表，均勻密布纖毛，為運(yùn)動(dòng)細(xì)胞器。身體的前部有口溝，由前端斜向伸至體中部，

口溝的底部為胞口，下部一短管斜向后部而入胞質(zhì)，稱胞咽。纖毛有規(guī)律的擺動(dòng)使食物在

胞咽聚結(jié)形成食物泡（吞噬泡），zui后脫離胞咽入胞質(zhì)。食物泡隨細(xì)胞質(zhì)由體后端到前端不

停環(huán)流，并與溶酶體（含酸性水解酶）融合，行使細(xì)胞內(nèi)消化。

根據(jù)食物泡中剛果紅指示劑的顏色變化（酸性時(shí)，為紅色；近中性時(shí)，為黃色；堿性時(shí)，

為藍(lán)色）?？梢杂^察到消化過程。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1．取一滴草履蟲培養(yǎng)液于載玻片上，放上幾根棉花纖維，以減慢草履蟲的運(yùn)動(dòng)。加蓋

玻片，制成臨時(shí)裝片。

2．觀察草履蟲的運(yùn)動(dòng)方式（觀察時(shí)光線可調(diào)暗些）：可見鏡下有許多樣似倒置鞋底的草

履蟲，體表纖毛不斷擺動(dòng)，蟲體以其中軸左旋前進(jìn)，若遇阻力則試觸后即刻回避而轉(zhuǎn)向。

3．觀察草履蟲的食物泡的形成：

1）在蓋玻片一側(cè)加一滴 l％的剛果紅指示劑，用 吸水紙從另一側(cè)吸引使指示劑進(jìn)入蓋片

下方，選一運(yùn)動(dòng)較遲緩的草履蟲，移入高倍鏡觀察吞噬活動(dòng)。

2）幾分鐘后可見草履蟲體內(nèi)出現(xiàn)許多紅色食物泡，隨著食物泡不停的在胞質(zhì)中環(huán)流，

食物不斷消化，泡內(nèi)酸性減弱或近中性，顏色漸漸呈黃色，食物泡漸小，zui后食物泡顏色

10

呈藍(lán)色，不能被消化的殘?jiān)?，環(huán)流到身體后部的胞肛排出，不排出時(shí)不易見到胞肛。