以下是ELISA實驗中標準品稀釋的關(guān)鍵步驟和注意事項，綜合多個高可信度來源整理：

　　一、標準品溶解準備?

　　離心處理?

　　開蓋前短暫離心(如1000 rpm/1min)，使管壁殘留粉末沉底。

　　若為凍干粉，避免直接吹吸，需靜置溶解15-30分鐘。

　　復溶緩沖液選擇?

　　血清/血漿樣本：使用試劑盒配套稀釋液。

　　細胞上清樣本：建議用細胞培養(yǎng)基稀釋。

　　二、梯度稀釋操作?

　　稀釋方法?

　　倍比稀釋法?：每管加入等體積稀釋液，從高濃度管(如S1)轉(zhuǎn)移至低濃度管(S2-S7)，吹打混勻10次。

　　混勻技巧?：

　　溫和顛倒或低速彈撥，避免蛋白變性。

　　稀釋后短暫離心回收管壁殘留液體。

　　濃度梯度設置?

　　常用范圍：1000 pg/mL至15.6 pg/mL(以IL-2為例)。

　　空白對照：直接用稀釋液作為零濃度對照。

　　三、質(zhì)量控制?

　　穩(wěn)定性驗證?

　　分裝凍存于-80℃，避免反復凍融。

　　檢測OD值波動(應<15%)、加標回收率(80-120%)。

　　曲線質(zhì)量評估?

　　R2值需≥0.99，標準曲線呈S型且中間線性良好。

　　異常排查：檢查稀釋液pH、溫度波動(25±2℃)。

　　四、特殊樣本處理?

　　脂溶性標準品?：先用含5% DMSO緩沖液預溶，再梯度稀釋。

　　高粘度液體?：稀釋前短暫離心，減少掛壁誤差。

　　五、記錄要求?

　　詳細記錄溶解時間、操作者、緩沖液批號及存儲位置。

　　關(guān)鍵實驗建議雙人復核操作流程。

　　通過規(guī)范操作可顯著提高ELISA實驗的重復性和準確性。

　　注：以上資料僅供參考，具體詳情來咨詢技術(shù) 老師或品牌供應商。

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