【制藥站 技術(shù)文章】俗話說(shuō)，“豬糧安天下”，生豬產(chǎn)業(yè)是關(guān)系國(guó)計(jì)民生的重點(diǎn)產(chǎn)業(yè)。經(jīng)過(guò)一年的努力，目前我國(guó)非洲豬瘟疫情勢(shì)頭總體減緩，養(yǎng)豬場(chǎng)戶(hù)信心逐步增強(qiáng)，接下來(lái)將以非洲豬瘟疫情防控和恢復(fù)生豬生產(chǎn)為重點(diǎn)任務(wù)。而在非洲豬瘟疫情防控、非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作的過(guò)程中，低速離心機(jī)等檢測(cè)儀器設(shè)備將受到高度的關(guān)注。
 

　　在低速離心機(jī)的使用過(guò)程中，如何正確操作是關(guān)鍵。對(duì)此，上海盧湘儀對(duì)檢驗(yàn)新型非洲豬瘟的操作步驟，包括檢測(cè)前準(zhǔn)備工作、實(shí)驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材、新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀樣本處理及要求、新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀操作步驟進(jìn)行了解答。
 

上海盧湘儀離心機(jī)
 

　　檢測(cè)前準(zhǔn)備工作
 

　　1、請(qǐng)?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀試劑盒，平衡至室溫。
 

　　2、從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正常現(xiàn)象；放置室溫，輕搖均勻，待結(jié)晶完全溶解后再配置洗滌液。可將20ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液，未用完的放回4℃。
 

　　3、需要做20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1：20稀釋?zhuān)?份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
 

　　實(shí)驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材
 

　　1.新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀(450nm)
 

　　1.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
 

　　3.準(zhǔn)備37℃恒溫箱或水浴鍋
 

　　4.蒸餾水或去離子水
 

　　新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀樣本處理及要求
 

　　1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
 

　　2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
 

　　3.新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
 

　　4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
 

　　5.新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
 

　　6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
 

　　7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
 

　　新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀操作步驟
 

　　1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
 

　　2.設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔，陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各50μL。
 

　　3.待測(cè)樣本孔加待測(cè)樣本10μL，樣本稀釋液40μL。
 

　　4.隨后陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
 

　　5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
 

　　6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光水浴鍋孵育15min。
 

　　7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在新型非洲豬瘟檢驗(yàn)儀450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
 

　　作為在美國(guó)獲得FDA認(rèn)證的中國(guó)離心機(jī)企業(yè)，上海盧湘儀目前已經(jīng)通過(guò)了ISO9001：2015質(zhì)量體系認(rèn)證和ISO13485：2003質(zhì)量體系認(rèn)證以及CE認(rèn)證，企業(yè)從設(shè)備的生產(chǎn)制造、銷(xiāo)售、到售后服務(wù)形了完整體系，旗下離心機(jī)產(chǎn)品更是出口到美國(guó)、德國(guó)、英國(guó)、加拿大、泰國(guó)等30多個(gè)國(guó)家。“不斷創(chuàng)新，面向未來(lái)”是盧湘儀追求的目標(biāo)，企業(yè)將竭盡全力，向用戶(hù)提供高質(zhì)量的產(chǎn)品和服務(wù)，并愿與國(guó)內(nèi)外企業(yè)建立廣泛的技術(shù)合作關(guān)系！